为判断去氢二异丁香酚是通过激活自噬流还是阻断自噬流诱发结肠癌细胞自噬效应,我们利用高效的自噬流检测体系对结肠癌细胞中去氢二异丁香酚处理引起的自噬流情况变化进行了检测。使用自噬双荧光标记腺病毒m RFP-GFP-LC3感染经去氢二异丁香酚处理后的结肠癌细胞,细胞中出现了明显的黄色荧光信号,而没有观测到红色荧光信号。这说明去氢二异丁香酚使结肠癌细胞发生了自噬流阻断型自噬效应。接着联合自噬通SB273005路抑制剂3-MA,自噬阻断剂CQ及Baf A1对去氢二异丁香酚诱发的自噬流进行检测,结果再次得到去氢二异丁香酚可使结肠癌细胞发生自噬流阻断型自噬效应。4.去氢二异丁香酚诱发内质网应激反应为探究去氢二异丁香酚抑制细胞生长和诱发细胞自噬的作用机制,利用基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA)方法再次对转录组测序结果中差异Ulixertinib molecular weight表达基因进行分析。结果得到去氢二异丁香酚处理组中未折叠蛋白反应(Unfolded protein response,UPR)相关因子发生明显富集,即去氢二异丁香酚可引起结肠癌细胞诱发内质网应激反应。透射电镜观察也发现去氢二异丁香酚处理后的结肠癌细胞中,有大量内质网囊泡化扩张现象出现且伴随脱颗粒效应。利用蛋白质免疫印迹法对内质网应激效应关键信号通路蛋白进行检测发Pevonedistat浓度现去氢二异丁香酚可显著激活IRE1α/XBP-1s/CHOP与PERK/e IF2α信号通路,相关蛋白表达水平显著上调,并呈现明显的浓度与时间依赖效应。这些结果表明,去氢二异丁香酚可通过激活未折叠蛋白反应引起结肠癌细胞发生内质网应激反应。5.去氢二异丁香酚通过激活内质网应激诱发自噬那么,去氢二异丁香酚引起的内质网应激反应对结肠癌细胞的作用是怎样的呢?利用RNA干扰技术分别成功构建IRE1α和PERK基因敲低细胞系PERKsi和IRE1αsi。