选取敏感性差异最大的Hep G2和HCCLM3细胞,并选取合适的浓度(Hep G2细胞半数致死量)进行后续实验;2.为了比较肝癌Hep G2和HCCLM3细胞的糖代谢表型,本研究应用q PCR实验检测细胞线粒体生物合成、线粒体氧化磷酸化及糖酵解相关基因的m RNA表达水平;应用Western Blot实验检测氧化磷酸化及糖酵解相关蛋白的表达水平;应用多功Danusertib化学结构能酶标仪检测二者的ATP水平、乳酸生成水平及胞外耗氧率;流式细胞仪用于检测活性氧(Reactive oxygen species,ROS);3.应用紫草素15μM分别处理Hep G2和HCCLM3细胞6 h、12 h以及24 h。应用流式细胞仪检测分析细胞凋亡比率、线粒体膜电势,Western Blot实验检测凋亡相关蛋白的表达Selleck Blasticidin S,应用流式细胞仪检测细胞ROS水平;4.应用紫草素15μM分别处理Hep G2和HCCLM3细胞不同时间,应用多功能酶标仪检测NAD~+/NADH、ATP水平、细胞外耗氧率;应用多功能酶标仪检测细胞培养基中的乳酸含量;应用q PCR及Western Blot实验分别检测线粒体生物合成相关基因及蛋白表达水平;5.应用紫草素15μMCP-868596浓度分别处理Hep G2和HCCLM3细胞不同时间,Western Blot实验及免疫荧光染色实验检测PKM2、HIF1α蛋白表达水平及亚细胞定位,应用q PCR检测HIF1α下游靶基因PDK1的表达;6.紫草素15μM与ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸(N-Acetyl-L-cysteine,NAC)10 m M联合处理细胞后,应用流式细胞仪检测分析细胞凋亡水平、线粒体膜电势,应用多功能酶标仪检测细胞ATP水平。