20%,糖醛酸含量为7.35%,硫酸根含量为14.67%;龙须菜多糖的糖含量为81.19%,糖醛酸含量为8.20%,硫酸根含量为9.33%。利用巨噬细胞RAW264.7探究紫菜多糖和龙须菜多糖的生物活性。MTT实验显示,两种多糖都能够有效促进RAW264.7的增殖,增强细胞活性;在5~100μg/m L浓度范围内,紫菜多糖刺激12 h,其促增殖作用随浓度升高而升高,刺激24

h,浓度在40μg/m L时细胞活力达到最高,是对照组细胞活力的2.7倍;龙须菜多糖浓度在12.5~200μg/m L范围内能够显著增强RAW264.7细胞活力,但各浓度之间无显著差异。中性红摄取实验显示,紫菜多糖和龙须菜多糖能够显著增强巨噬细胞的吞噬能力,不同浓度(25、50、100μg/m L)的紫菜多糖处理组RAW264.7吞噬能力分别是对照组的1.8、2.1、2.5倍,不同浓度(50、100、200μg/m L)的龙须菜多糖处理组RAW264.7吞噬能力分别是对照组的1.7、2.0、2.4倍。此外,紫菜多糖和龙须菜多糖都能够有效促进RAW264.7释放NO、TNF-α、IL-6等细胞因子;RAW264.7经不同浓度(25、50、100μg/m L)紫菜多糖刺激后,NO释放量为34.76、49.20、53.18μmol/L,与对照组(1.722μmol/L)相比显著上升,TNF-α含量为136.76、147.08、141.72 ng/L,与对照组(109.84 ng/L)相比显著上升,IL-6的含量(147.17、160.55、155.13 ng/L)与对照组(133.01 ng/L)相比显著上升;经50、100、200μg/m L龙须菜多糖刺激后,NO释放量由对照组0.21μmol/L上升到50.31、55.13、69.66μmol/L,TNF-α含量为132.20、141.27、149.93ng/L,与对照组(107.34 selleck化学药品 ng/L)相比显著上升,IL-6的含量(142.20、151.27、159.93 ng/L)与对照组(127.34 ng/L)相比显著上升。实验结果表明,紫菜多糖和龙须菜多糖促进RAW264.7释放NO主要是通过JNK和JAK2两条信号通路途径。综上所述,从坛紫菜和龙须菜中纯化的多糖能够有效激活RAW264.7,促进其细胞的增殖,增强其吞噬能力,并调节RAW264.7分泌相关细胞因子。
目的:本实验从张景岳之“阴阳互济”理论出发,选取中医经典补肾填精方剂左、右归丸并将其拆方,以两方的共有药为共同方组,以左归丸中滋阴药为滋阴方组,以右归丸中补阳药为补阳方组,以雌二醇戊酮片为阳性对照组,以绝经后骨质疏松症(PMOP)大鼠BMSCs为研究对象,着重观察左、右归丸及其拆方水煎液在PMOP大鼠体内代谢后提取的BMSCs的成骨分化潜能,并从ERK1/2信号通路途径探讨左、右归丸及其拆方对PMOP大鼠BMSCs成骨诱导的可能机制。材料与方法:采用双侧去卵巢法建立绝经后骨质疏松症模型,SPF级2月龄Sd雌性未生育大鼠90只,200-220g,适应性喂养1周后按数字随机法随机分为正常组10只、假手术组10只和手术组70只,正常组继续常规饲养,手术组实施双侧去卵巢手术造模处理。术后3天,将行双侧切除卵巢术后存活的大鼠再次按体重分层随机分为7组,最后的分组结果为正常组(Control)10只、假手术组(Sham)10只、模型组(OVX)、补佳乐组(BJL)、左归丸组(ZGW)、右归丸组(YGW)、共同药方组(GTY)、滋阴药方组(ZYY)和补阳药方(BYY)组各8只。按每kg体重大鼠的给药量为人的6.3倍计算,并且每次给大鼠灌胃量为正常人用药量的2倍,每日灌胃1次,空白对照组、假手术组、模型组均灌服蒸馏水,其余各组分别灌服各组相应制备好的药液。给药12周后分别提取各组大鼠BMSCs,采用MTT法检测BMSCs增殖率,PNPP法检测BMSCs碱性磷酸酶(ALP)活性,采用改良钙钴法检测ALP活性,茜素红法观察矿化结节的形成,并用Quantitative

寻找更多 real-time PCR法检测核心结合因子(Cbfα1)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)m RNA表达,用Western blot法检测Cbfα1、ColⅠ蛋白表达。另外,采用ERK1/2、MAPK信号阻滞剂方法,以PD98059(ERK1/2特异阻滞剂)干预PMOP大鼠BMSCs,并用Quantitative real-time PCR法检测Cbfα1、ColⅠm RNA表达,用Western blot法检测Cbfα1、ColⅠ、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达。结果:1.BMSCs的鉴定经流式细胞仪检测,各组BMSCs的CD29、CD90表达均为阳性,且CD29的阳性率均在94%以上,CD90的阳性率均在50%以上。CD45表达为阴性,其中OVX和BJL组的阴性率在30%以下,其余各组的阴性率在6.4%以下。2.左、右归丸及其拆方对PMOP大鼠BMSCs增殖的影响2.1 CHIR-99021化学结构 BMSCs生长曲线绘制BMSCs生长曲线大体呈S形,接种后第1~2d为潜伏期,从第3d细胞开始增殖并进入对数生长期,第5~6d达到高峰,以后进入平台期。2.2左、右归丸及其拆方对PMOP大鼠BMSCs增殖的影响结果显示,左、右归丸及其拆方对PMOP大鼠BMSCs的促增殖作用呈时间相关性。在第1d时,与Control组比较,OVX、ZGW、ZYY、BJL组有显著性差异(P0.05)。第3d时,与Control组比,ZGW、YGW、ZYY与BJL组有显著性差异(P<0.05),只有BJL组与OVX组比有显著性差异(P<0.05)。第5d时,OVX、ZGW、YGW、GTY与BJL组与Control组比较都有统计学意义(P<0.05),同第3d一样只有BJL组与OVX组比有显著性差异(P<0.05)。第7d时,与Control组及OVX组比较,ZGW、YGW、BJL组均有显著性差异(P<0.05),与ZGW组比较,Sham、GTY、ZYY、BYY组有有统计学意义(P<0.05);YGW组ALP活性在1d、5d、7d时与Control、OVX组比较著性提高(P<0.05);而BJL组在1d、3d时与Control、OVX组比较著性提高(P<0.