实验动物:6周龄SD大鼠,雌性,体重180g-220g。2.动物模型制备:大鼠经乙醚麻醉后,颈前暴露气管,一次性气管内注入0.4% BLM生理盐水注射液(5mg/kg)。3.分组:共分两组,每组各36只大鼠。(1)肺纤维化组(用F代表)分为6个亚组:F1、F3、F7、F14、F28、F35组,分别代表给予BLM后第1、3、7、14、28、35天后处死;(2)正常对照组(用N代表):取同期大鼠处死。4.研究方法:应用苏木素-伊红(HE)染色法观察肺组织病理形态学变化,应用实时荧光定量PCR(real-time PCR)分析肺组织中TGF-βRⅡ各亚型的表达。 结果:1.光镜病理形态学观察(HE染色):肺纤维化造模成功,给予BLM后第1、3、7、14、28、35天纤维化程度逐渐明显。2.实时荧光定量PCR分析各组不同阶段肺组织中TGF-βRⅡ各亚型的表达变化:ActR-ⅡA和ActR-ⅡB在纤维化形成过程中表达较低,表达水平最高的阶段不到正常对照组的一倍,而TβR-Ⅱ在给予BLM后第一天即处于高表达水平,随后在第7天达到第一个高峰,继而逐渐下降至第28天表达水平为最低状态接近基线,随后又升高,到第35天仍处于高水平。AMHR-Ⅱ在给予BLM后第1天即开始升高,至第14天达到高峰,后逐渐下降,在第28天和第35天时降之基线附近。纤维化组TβR-Ⅱ、ActR-ⅡA、ActR-ⅡB和AMHR-Ⅱ同正常对照组比较,P<0.05,具有统计学意义。纤维化各组因子比较,仅TβR-Ⅱ因子与其他各因子相比,P0.05,没有统计学意义。
结论:1.TβR-Ⅱ、ActR-ⅡA、ActR-ⅡB和AMHR-Ⅱ均参与肺纤维的形成过程。2.TβR-Ⅱ在早期炎症反应时期和纤维化形成后期均呈高表达水平,其升高的倍数最高达正常对照组的七倍。
恶性肿瘤(通称癌症)是当前危害人类健康的重要疾病之一。诱导分化疗法是肿瘤治疗学的新突破,即在体内分化诱导剂的作用下,使恶性肿瘤细胞向正常或接近正常细胞方向分化逆转,从而恢复正常细胞的表型及功能。维甲类化合物是分化诱导剂的代表。本实验室以全反式维甲酸(all-trans 3-MA浓度 Selleck Epacadostat retinoic acid,ATRA)为先导化合物,对其碳链末端极性基团进行结构改造并对环己烯环进行结构修饰,合成了一系列全新的维甲酸类衍生物,并完成了这些化合物的纯化、鉴定等工作。经药物构效学筛选,其中4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl
retinate,ATPR)具有较强的生物学活性,有望成为一种具有自主知识产权的诱导分化新药。本研究采用急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4为对象,观察新型维甲酸类衍生物ATPR对NB4细胞的抑制增殖和诱导分化活性并探讨ATPR对NB4细胞转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)信号通路、c-myc癌基因及人端粒酶逆转录酶(human
telomerase reverse transcriptase,hTERT)表达的影响,部分阐明ATPR诱导NB4细胞分化的分子机制。 目的: 本研究观察新型维甲酸类衍生物ATPR对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4的抑制增殖和诱导分化活性并对其诱导分化的机制进行探讨。 方法: 1.采用细胞计数法观察NB4细胞在不同浓度的ATPR作用下生长曲线的变化;NBT还原试验法分析在不同浓度ATPR作用下细胞的功能分化程度;流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测NB4细胞表面分化抗原CD11b、CD13表达及细胞周期的变化。 2.采用RT-PCR法检测TGF-β1信号通路中TGF-β1、TGF-βⅠ型受体(TβRⅠ)、TGF-βⅡ型受体(TβRⅡ)、Smad2、Smad3、Smad4及Smad7 mRNA表达的变化。并通过瑞氏染色法、NBT还原试验法及表面分化抗原的检测观察TβRⅠ特异性抑制剂SB431542对ATPR诱导分化作用的影响。 3.采用RT-PCR、Western Blot技术检测ATPR引起的NB4细胞中c-myc、hTERT NVP-BKM120制造商 mRNA及蛋白表达的变化。 结果: 1. ATPR能抑制NB4细胞的增殖,并呈浓度及时间依赖性。ATPR诱导分化活性表现为NBT阳性细胞率增加;NB4细胞表面分化抗原CD11b表达增加,而CD13表达减少。细胞周期检测显示ATPR作用后G0/G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降,呈G1期阻滞。 2. ATPR作用于NB4细胞后,TGF-β1信号通路中TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad2、Smad3 mRNA表达量在24h时均无明显改变,自2d或3d开始上升,至4d或5d达峰值;Smad4 mRNA表达量从4d开始增加,在5d时达峰值;而Smad7 mRNA表达量于5d才开始出现增加的趋势。TβRⅠ特异性抑制剂SB431542可明显抑制ATPR对NB4细胞形态学、NBT阳性细胞百分比、CD11b及CD13表达量的影响。 3. ATPR作用后,NB4细胞中c-myc、hTERT mRNA及蛋白表达量明显减少,并呈时间依赖关系。 结论: 1. ATPR对NB4细胞有较强的增殖抑制及诱导分化活性,进一步对其抗肿瘤机制进行深入研究,将有助于开发新的有效的抗癌药物,以改善癌症的预后,以便拓展维甲类化合物在肿瘤治疗领域中的应用。 2.上调TGF-β1信号通路可能是ATPR诱导NB4细胞分化的作用机制之一。 3.