0mmol/LLB的培养液处理,non-pretreated组用含2mmol/LLB的培养液处理。各组细胞经LB处理4h用流式细胞术检测细胞内ROS水平,四氯四乙基苯并咪唑基羰花青碘化物(5,5′,6,6′-tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethylbenzimidazole-carbocyanide iodine, JC-1)检测线粒体膜电位,Western
blot法检测p38MAPK和p-p38MAPK蛋白表达水平,激光共聚焦显微镜检测线粒体内Cl-荧光强度,CCK-8法检测细胞活力,FCM和Hochest33258检测细胞凋亡率。同时,未用LB处理的各组细胞在相同时间点检测上述相同的指标作为对照。 计量资料以均数±标准差(x±s)表示,采用SPSS17.0统计软件分析。细胞ROS含量、Cl-荧光强度、线粒体膜电位变化、细胞活力、细胞凋亡率、p38和p-p38MAPK蛋白表达量采用两因素析因设计资料方差分析。组间比较采用LSD法(方差齐)或Dunnett’s Histone Methyltransferase抑制剂 T3法(方差不齐)。P<0.01)。流式细胞术检测线粒体膜JC-1荧光强度比值显示,DIDS组和DIDS+SB203580组分别为0.82±0.01和0.7±0.01,均高于non-pretreated组(0.52±0.01),差异均有统计学意义(P<0.01)。激光共聚焦显微镜检测线粒体内Cl-浓度显示,DIDS组和DIDS+SB203580组的Cl-浓度均低于non-pretreated组,差异有统计学意义(P<0.01),但均低于DIDS+SB203580组(P<0.01)。流式细胞术检测细胞凋亡率显示,LB处理后DIDS组、DIDS+SB203580组、SB203580组和non-pretreated组分别为23.4±1.58%、12.73±0.96%、24.53±0.93%和38.17±0.22%。Hoechst33258染色法检测显示,经LB处理后DIDS组、DIDS+SB203580组、SB203580组和Non-pretreated组的凋亡率分别为22.88±1.13%、12.45±0.74%、24.68±0.85%和37.8±0.99%。提示经LB处理后DIDS组.DIDS+SB203580组和SB203580组的凋亡率均低于non-pretreated组(P<0.01),DIDS+SB203580组的凋亡率低于SB203580组(P<0.01)。而鞘内注射LB组大鼠脊髓组织ROS水平均较未注射组水平显著升高(均有P<0.01)。而鞘内注射LB组大鼠脊髓背角浅层神经组织caspase-3阳性细胞数均较未注射组显著升高(均有P<0.01)。而鞘内注射LB组大鼠脊髓背角浅层caspase-9阳性细胞数均较未注射组显著升高(均有P<0.05)。而鞘内注射LB组大鼠脊髓p-p38MAPK蛋白表达水平均较未注射组显著升高(均有P<0.01)。而鞘内注射LB组大鼠脊髓背角浅层TUNEL阳性细胞数均较未注射组显著升高(均有P
骨质疏松症是一种以骨量减少、骨组织显微结构退行性改变,骨的脆性增加,易于发生骨折为特征的全身代谢性骨骼疾病,多发于绝经后妇女及老年人。骨质疏松性骨折发病率高,严重威胁着人们的生命健康,并给社会和国家带来了沉重的经济负担。目前,用于治疗骨质疏松症的西药,如鲑鱼降钙素、双膦酸盐类和重组人甲状旁腺素等,具有明显的副作用且价格昂贵。因此,研究开发安全、高效、经济的抗骨质疏松症药物已成为目前的研究热点。据《神农本草经》记载,鹿角盘具有温补肝肾、强筋健骨、活血消肿等作用。
BMS-777607研究购买 经我们课题组前期的体内实验研究发现,鹿角盘微切助粉对去卵巢大鼠绝经后骨质疏松症模型有明显且良好的治疗效果。但是,关于鹿角盘防治骨质疏松症的作用机制至今仍未有报道。因此,本论文旨在系统地研究鹿角盘提取物对体外培养的成骨细胞骨形成功能和破骨细胞骨吸收活性的影响,并进一步探讨其防治骨质疏松症的作用机制。具体研究内容和结果如下： (1)采用微切变-助剂互作技术加工制备鹿角盘微切助粉。然后经粒径分析及扫描电镜观察分析细胞的破碎程度,并检测其中与骨质疏松症相关的活性物质的含量。
selleck公司 粒径分析及扫描电镜观察结果显示,经微切变-助剂互作技术处理后,鹿角盘微切助粉在粒径1-30μm范围内的颗粒数占82.73%,且细胞已被充分破碎,细胞内有效成分被暴露出来,呈释放的状态。活性物质含量分析结果显示,鹿角盘微切助粉中含有328.79士34.21pmol/L雌二醇、25.38士4.48nmol/L睾酮、17.56士3.45nmol/L孕酮,0.750±0.033μg/g类胰岛素生长因子-1,16.17±0.52mg/L柠檬酸钙和133.6±13.55mg/L钙,而不含有延胡索酸钙。且这些活性物质的含量均高于其粗粉,说明微切变-助剂互作技术增加了目标活性物质的溶出量,有利于鹿角盘中活性成分的释放,体现了该技术的优越性。 (2)以人类成骨样细胞MG-63为研究对象,系统地研究了鹿角盘提取物(水提物和醇提物)对成骨细胞生长、分化和矿化的影响及其防治骨质疏松症的可能作用机制。 LDH活性检测和细胞形态观察结果表明,鹿角盘提取物对成骨细胞没有细胞毒性作用。采用结晶紫试验、中性红吸收试验、台盼蓝排斥试验、MTT法和ALP活性检测考察细胞的生长和分化情况。结果表明,鹿角盘提取物不仅刺激了成骨细胞的生长和增殖,而且还促进了成骨细胞的分化。此外,茜素红-S染色和4-羟脯氨酸含量的检测结果显示,鹿角盘提取物是通过促进钙的沉积和增加Ⅰ型胶原蛋白的合成和分泌,促进矿化骨基质的形成,从而发挥促进骨形成的作用。采用ELISA法和RT-PCR分别检测了OPG和RANKL的蛋白含量和mRNA的表达量,结果显示,鹿角盘提取物极显著地增加了成骨细胞中OPG蛋白含量和OPG mRNA的表达量,而降低了RANKL蛋白含量和RANKL mRNA的表达量,提高了成骨细胞中OPG/RANKL的比值,间接地抑制破骨细胞的分化和成熟,从而起防治骨质疏松症的作用。 (3)以RAW264.