1过表达载体，经酶切鉴定及测序鉴定正确后转染胃癌细胞SGC7901及AGS，并采用Western-blot检测转染前后胃癌细胞ERp29表达水平变化。 结果：1.Western-bot结果：8对组织中有7对组织的ERp29蛋白在胃癌组织中表达下降，而另外1对标本ERp29在胃癌的表达水平则较高，结果分析显示ERp29在胃癌呈低表达具有统计学意义（p=0.032）。 2.RT-PCR结果：检测的8对组织中， ERp29在胃癌组织的mRNA表达水平均明显低于癌旁正常黏膜组织的表达，差异具有显著统计学意义（P＜0.05）。 3.组织芯片免疫组化结果：

（1）、ERp29在胃癌组织的表达水平明显低于癌旁正常黏膜组织的表达，其阳性表达率分别为47.1%、85.3%，差异有显著性（P=0.001）。 （2）、ERp29在胃癌中的表达与性别、淋巴结转移、TNM分期密切相关（P＜0.05），而与年龄、浸润深度、是否浆膜浸润、分化程度、血管侵犯、周围神经侵犯、组织学分型、肿瘤大小、腹膜种植及远处转移等临床病理参数无明显关系（P＞0.05）。 （3）、ERp29在男性胃癌患者及女性胃癌患者的阳性表达率分别为53.6%和28.9%，差异具有显著意义（P=0.004），且其表达与TNM分期、是否淋巴结转移、淋巴结转移数目呈负相关关系（P值分别为0.006、0.027、0.002）。 4.重组质粒ERp29-pcDNA3.1转染胃癌细胞后经western-blot验证，结果显示转染后胃癌细胞ERp29蛋白表达水平明显升高。 结论：1.ERp29在胃癌组织呈低表达。 2.ERp29是一个与胃癌淋巴结转移及TNM分期密切相关的潜在抑癌因子，在胃癌的发生、发展中起着重要的作用。 3.成功构建ERp29过表达载体。
目的 本课题研究瘦素（leptin）调控乳腺癌细胞与肿瘤相关巨噬细胞（tumor associated macrophages, TAMs）交互对话对乳腺癌侵袭转移的影响，并对其相关分子机制进行了探讨。 方法： 1.用PMA及IL-4处理THP1细胞，将其诱导成M2型巨噬细胞(M2macrophage)，倒置显微镜下观察细胞形态的改变，并用流式细胞术检测其分子表型（CD206、IL-10、IL-12及TGF-β）的改变。 selleck products 不 2.qRT-PCR及Western bloting法检测leptin作用的M2型巨噬细胞分泌的关键因子及其水平。 3.免疫荧光分析、qRT-PCR及Western bloting法检测leptin作用下M2型巨噬细胞中Ob-R的表达水平。 4.划痕试验和Transwell侵袭试验检测IL-8对乳腺癌MCF7、MDA-MB-231细胞迁移及侵袭的影响；用IL-8抗体中和leptin处理的M2型巨噬细胞-乳腺癌细胞共培养系统中的IL-8后，检测乳腺癌细胞迁移侵袭的变化情况。 5.采用qRT-PCR及Western bloting，用常用信号通路抑制剂处理，检测leptin作用M2型巨噬细胞分泌IL-8的相关信号通路（MAPK/ERK1/2和p38MAPK），并进一步验证这些通路的激活是通过leptin-ObR轴而启动。 6.免疫组织化学染色（IHC）检测人乳腺癌样本中CD68，Ob-R及IL-8的表达情况。 7.取6-8周Babl/c雌性裸鼠，在近右下肢乳腺脂肪垫处移植MDA-MB-231细胞，建立裸鼠乳腺癌移植模型；腹腔内注射Clophosome-Clodronate

Liposomes耗竭小鼠体内的巨噬细胞后，待肿瘤长至一定大小，瘤内注射leptin，观察肿瘤的生长情况、生存期及肿瘤肝肺转移情况；免疫组织化学染色检测肿瘤CD68，Ob-R及IL-8的表达情况。 结果： 1.采用PMA及IL-4将THP1诱导成M2型巨噬细胞，细胞由悬浮状态变为贴壁状态，且少数细胞伸出伪足；流式细胞术检测发现M2型巨噬细胞表面标志CD206为阳性，且与THP1相比，其IL-10及TGF-β为高表达，而IL-12为低表达。 2. Leptin作用使M2型巨噬细胞IL-8表达明显升高，且IL-8能促进乳腺癌MCF7及MDA-MB-231细胞的迁移及侵袭，而中和了M2型巨噬细胞-乳腺癌细胞共培养系统中的IL-8后，乳腺癌细胞的迁移及侵袭被明显抑制。 3.THP1及M2型巨噬细胞均表达Ob-R，且leptin作用下M2型巨噬细胞的Ob-R表达升高；Leptin能与Ob-R结合，激活M2型巨噬细胞MAPK/ERK1/2和p38MAPK信号通路，关键分子p-ERK1/2及p-p38表达明显升高，从而促进IL-8表达升高。 4.在人转移性乳腺癌样本中，CD68、Ob-R及IL-8的表达显著高于在良性乳腺样本和原位乳腺癌样本中。

5.在裸鼠乳腺癌移植模型中，leptin不仅促进乳腺肿瘤的生长和降低小鼠的生存期，而且肿瘤的肺转移可能与leptin促进TAMs分泌IL-8有关。 结论： 1.Leptin通过leptin-Ob-R轴，激活M2型巨噬细胞的MAPK/ERK1/2和p38MAPK信号通路，从而促进TAMs IL-8表达升高；leptin通过调控TAMs分泌IL-8，影响TAMs-乳腺癌细胞交互对话，从而促进乳腺癌的迁移及侵袭。 2.在人转移性乳腺癌样本中，TAMs的数量、Ob-R及IL-8的表达显著高于良性乳腺样本和原位乳腺癌样本。 Selleck Pifithrinα 3.在荷瘤裸鼠体内，leptin促进乳腺肿瘤的生长和降低小鼠的生存期。而且肿瘤的肺转移可能与leptin促进TAMs分泌IL-8有关。
目的探讨骨形态发生蛋白9对人肺腺癌细胞A549侵袭、迁移的影响及可能机制。 方法采用免疫组织化学方法检测BMP9和IL6蛋白在临床肺腺癌及其癌旁组织中的表达情况，以人肺腺癌细胞A549作为研究对象，用腺病毒BMP9感染A549细胞制备AdBMP9/A549细胞，把此组当成实验组。，用GFP腺病毒感染A549细胞，制备AdGFP/A549细胞，把这一组作为实验的对照组；把A549细胞未经腺病毒感染，作为空白对照组。实验采用逆转录PCR检测三组细胞BMP9mRNA的表达，同时采用Western blot检测三组细胞中BMP9蛋白的表达情况。通过细胞划痕实验﹑Transwell侵袭实验检测三组细胞迁移及侵袭的改变是否有差异，RT-PCR及Western blot检测被腺病毒BMP9感染后，IL6的mRNA和蛋白表达情况；同时用Western blot技术检测PI3K/Akt信号通路中总Akt和磷酸化Akt蛋白表达。 结果与癌旁组织相比，BMP9与IL6蛋白高表达于肺腺癌组织。具有统计学意义（p＜0.05）。A549细胞感染BMP9腺病毒后，AdBMP9/A549组的BMP9mRNA和蛋白的表达高于AdGFP/A549组和A549组。AdBMP9/A549组的划痕愈合率为(97.4±2.6)％，AdGFP/A549的划痕愈合率为(85.4±2.1)％。A549组的划痕愈合率为（.5±3.