MiRNAs作为常见的非编码RNA,具有重要的生物学作用,通过与下游靶基因3’UTR区域结合,能够调控其表达,影响下游通路活性,进而影响肿瘤细胞表型改变,最终调控肿瘤的发生进展。具有相同种子序列的miRNAs被归类为一个miRNA家族,同一个家族成员具有相似的作用。MiR-148/152家族包括miR-148a、miR-148b及miR-152,该家族成员在恶性肿瘤中表现为MCC950生产商抑癌作用。在前期的工作基础中,我们证实了miR-148/152家族成员在胃肠癌组织中表达显著低于癌旁非癌组织,且低表达与肿瘤的恶性表型相关。此外,细胞的功能实验证实miR-148b还可抑制胃肠癌细胞的增殖。基于上述结果,本研究将利用基因敲除小鼠,构建胃癌模型,高度还原胃癌体内的发生进展过程,明确miR-148/152家族对胃癌的调节作用,并且通过生半抑制浓度信分析及一系列体内外实验深入探究相关的分子机制。方法本项目基于Cre/loxp系统,利用同源重组原理,采用受精卵同源重组的方式进行flox修饰,进而与特异性表达Cre重组酶的小鼠交配获得miR-148a、miR-148b及miR-152单基因敲除小鼠。基于此,将各单基因敲除小鼠相互杂交,构建三基因敲除小鼠。提取小鼠鼠尾DNA,PCR扩增后应用琼脂糖和凝胶电泳鉴定各组小鼠基因型,原位杂交以及real-time PCR检测各组小鼠胃黏膜miR-148a、miR-148b及miR-152表达,结合基因型鉴定结果最终证实单基因及三基因敲除小鼠构建成功。解剖小鼠后大体观察、H&E染色比较各器官改变。免疫组化实验检测相关生化指标在各组小鼠胃黏膜中表达情况。应用MNU诱导小鼠胃癌模型,H&E染色观察胃癌诱导情况,原位杂交实验检测miR-148/152家族成员在胃癌诱导过程中的表达改变。