05);经H_2O_2或SPER/NO或HU处理后的SMMC-7721和HepG2细胞较未经处理的SMMC-7721和HepG2细胞增殖明显加快(p0.05)。

结论:1.在正常条件下,人正常肝细胞株中不表达miR-155,而人肝癌细胞株中有少量表达。2.在慢性炎症应激因素作用下人正常肝细胞株中miR-155有微量表达。3.在慢性炎症应激因素作用下肝癌细胞株中miR-155表达量升高、肝癌细胞增殖加快及细胞周期发生改变。4.三种慢性炎症应激因素作用下的两种肝癌细胞株,上述变化无明显区别。
目的研究p38MAPK抑制剂CBS3830在糖尿病大鼠自体移植静脉中抗内膜增生的作用,从而探讨p38MAPK信号通路在静脉桥狭窄中的作用,为糖尿病患者桥血管再狭窄的预防及治疗提供新的途径。 方法将30只SPF级SD雄性大鼠(6～8周龄,体重200～250g,),随机分为假手术组(sham 点击此处 group, S)、对照组(control group,C )、药物组(drug group,D),每组10只。假手术组仅模拟手术过程,不进行血管移植和药物干预;另外两组首先采用腹腔注射链脲佐菌素法建立糖尿病动物模型,然后再采用改良cuff法建立自体静脉移植模型,造模前1 h药物组经胃管灌入0.3 mg/ml的CBS3830 10ml/kg,对照组同法给予等体积的CBS3830溶媒1%甲基纤维素。分别于术前及术后1、3、7 d,采用ELSIA法检测大鼠血清中的TNF-α、IL-1β和AGEs;免疫组织化学染色检测各组大鼠血管标本中核转录因子kappa B(NF-κB)的表达;于第7天处死动物并获取移植静脉标本,HE染色法观察大鼠移植静脉内膜病理变化。蛋白印迹技术(western blotting)测定p38、P-p38、β-actin的表达。 结果药物组TNF-α在0-3d呈上升趋势,第3d时水平达到最高,与对照组相比无明显差别,此后表达水平逐渐下降,至第7d时降到最低,明显低于对照组,有显著性差异(p<0.05)。药物组IL-1β水平在1d时最高,此后表达水平逐渐下降,至第7d时明显低于对照组(p<0.01)。药物组、对照组的AGEs含量均较假手术组明显增加,两组间无明显差异。HE示药物组内膜增生明显低于对照组,差异具有统计学意义(p
目的:动脉粥样硬化(AS)是威胁人类健康的主要疾病之一,对于AS发病机制一直是心血管疾病研究的热点。其中血管平滑肌细胞(VSMC)由中膜层向内膜下间隙迁移并导致异常增生是动脉粥样硬化等心血管疾病发生发展的一个重要环节。PDGF作为一种强有力的体外趋化剂,可以诱导VSMC增殖和迁移。ROCK是Rho下游靶效应分子,分ROCKⅠ和ROCKⅡ两种亚型,参与细胞迁移、细胞增殖、细胞粘附、细胞骨架重组等多种细胞行为,而这些功能又参与许多心血管疾病的发生、发展,而ROCK参与细胞迁移的分子机制尚不十分清楚。有文献报道,MAPK家族成员参与细胞的增殖和迁移,如p38

时间 MAPK,ERK(胞外信号调节激酶)。此外在细胞迁移过程中,基质金属蛋白酶(MMPs)可以广泛降解ECM,为VSMC的迁移扫清道路,促进VSMC的迁移。本实验研究目的在于通过PDGF介导血管平滑肌细胞迁移的模型,阐述ROCKⅠ亚型调控血管平滑肌细胞研究的分子机制,为阐明动脉粥样硬化发生机理提供理论依据。 方法:(1)利用瞬时转染和稳定转染方法过表达ROCKⅠ,通过RNA和蛋白水平检测ROCKⅠ的表达情况;(2)利用Boyden chamber和划痕方法,检测ROCKⅠ过表达后,细胞的迁移情况;(3)利用Western blot方法,在10ng/ml PDGF刺激下,检测p-ERK和p-p38在不同时间的表达情况;(4)利用Western blot方法,在不同浓度U0126(ERK抑制剂)和SB203580(p38抑制剂)处理下,检测p-ERK和p-p38表达情况;(5)利用Boyden chamber法,在不同浓度U0126和SB203580处理下,检测对细胞迁移的影响;(6)利用Western blot和明胶酶谱法,检测U0126和SB203580对MMP2蛋白表达和活性的影响;(7)利用免疫荧光方法,在不同浓度U0126和SB203580处理下,检测抑制剂对细胞伪足形成的影响。 Selleck Doxorubicin 结果:(1)瞬时转染ROCKⅠ过表达后,细胞迁移明显增加;(2) PDGF (10ng/ml)刺激下,p-ERK和p-p38表达水平分别出现峰值;(3)不同浓度U0126和SB203580处理下,p-ERK和p-p38表达随浓度依赖性下降;(4)在不同浓度U0126和SB203580处理下,细胞迁移能力随浓度依赖性下降;(5)U0126和SB203580均降低MMP2的蛋白表达和活性;

(6)U0126和SB203580减少细胞伪足的形成。 结论:(1)进一步证实ROCKⅠ与血管平滑机细胞的迁移密切相关; (2) PDGF介导的细胞迁移,可能是通过Rho/ROCK/MAPK通路实现的,并通过降解细胞外基质,为细胞迁移提供条件。
目的探讨胡黄连苷Ⅱ在大鼠脑缺血再灌注损伤中的抗氧化作用,为胡黄连苷Ⅱ在脑缺血损伤的临床应用提供理论依据。方法成年健康Wistar大鼠100只.应用线栓法建立MCAO/R模型,随机分为假手术组,阴性对照组,阳性对照组,药物治疗组。假手术组不做处理,阴性对照组经尾静脉注射生理盐水,阳性对照组注射丹参素钠10mg/kg,药物治疗组注射胡黄连苷Ⅱ10mg/kg。Bederson法进行神经功能评分,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定脑梗塞体积,免疫组化检测神经细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和超氧化物歧化酶(SOD)的表达变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑组织匀浆中iNOS和SOD的含量,TUNEL法检测细胞凋亡。结果假手术组神经行为功能正常,无脑梗死。假手术组免疫组化示大鼠脑组织iNOS和SOD弱表达,TUNEL阳性细胞数量较少,散在分布。阴性对照组神经行为功能评分、脑梗死体积较假手术组有明显差异(P<0.05),免疫组化示大鼠脑组织iNOS表达增强,SOD表达明显减弱,脑组织匀浆iNOS增高,SOD降低,TUNEL阳性细胞数量增多,较假手术组有明显差异(P<0.05)。阳性对照组和胡黄连苷Ⅱ组神经行为功能、脑梗死体积低于阴性对照组(P<0.05)。阳性对照组和胡黄连苷Ⅱ组免疫组化示大鼠脑组织iNOS表达及脑组织匀浆iNOS和TUNEL阳性细胞数量均低于阴性对照组(P<0.05),而大鼠脑组织SOD表达及脑组织匀浆SOD均高于阴性对照组(P0.