方法应用荧光素酶报告基因和凝胶电泳迁移率实验检测AP-1在rhGH诱导的单核细胞中的活化程度,用蛋白免疫印迹实验检测细胞外信号调控激酶(ERK)和磷酸化的ERK(p-ERK)的表达。结果与空白对照组比较,LPS组和rhGH组AP-1的转录活性升高(P<0.01);rhGH+脂多糖(LPS)组AP-1的转录活性较LPS组有明显下降(P<0.01还有)。同时,rhGH和LPS的预处理对ERK无显著影响,但均能促进p-ERK蛋白的表达,rhGH的预处理则能减弱LPS刺激p-ERK蛋白表达。结论 rhGH可通过双向调节ERK的磷酸化而影响THP-1单核细胞中AP-1的转录活性。”
“目的探讨脂质体法转染Raf激酶抑制蛋白(RKIP)基因对宫颈癌细胞增殖的影响及RKProtease Inhibitor Library临床试验IP在宫颈癌转移中的作用。方法应用脂质体法,将含有人RKIP基因的反义质粒asRKIP及空白质粒pcDNA3.1(-)分别转染宫颈癌Caski细胞,采用G418筛选出稳定转染的宫颈癌Caski细胞。空白质粒转染后Caski细胞即空白对照细胞命名为Caski-(-),asRKIP转染后Caski细胞分为平行的两组分别命哪里名为Caski-asRKIP#1细胞和Caski-asRKIP#2细胞,应用Western Blotting方法检测各种Caski细胞中RKIP蛋白的表达,建立RKIP表达下调的宫颈癌细胞系(转染细胞系及对照细胞系);采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、软琼脂集落形成实验和Transwell小室实验检测RKIP表达下调对宫颈癌细胞增殖的影响。结果成功建立了RKIP表达下调的Caski宫颈癌细胞系。