其次,核质分离实验确定HMGA1P6定位,转染microRNA mimics 及 inhibitors 验证 microRNA 对 HMGA1P6、HMGA1/2 的表达调控作用;构建HMGA1/2-3′UTR表达载体及双荧光素酶报告载体,构建HMGA1P6野生型及microRNA结合位点突变型双荧光素酶报告载体,利用双荧光素酶报告实验验证microRNA与HGPCR Compound Library concentrationMGA1P6、HMGA1/2是否存在直接结合关系;共转染实验验证三者之间是否存在ceRNA保护网络;RIP实验、RNA pull-down实验验证HMGA1P6与microRNA是否存在结合关系。最后,拯救实验验证HMGA1P6与HMGA1的上下游关系。结果1、HMGA1P6在卵巢癌细胞中调控HMGA1/2的表达为探究HMGA1P6促selleck HPLC控制进卵巢癌恶性行为的机制,我们猜测HMGA1P6可能调控HMGA1/2的表达。在卵巢癌细胞中敲低HMGA1P6后检测HMGA1及HMGA2的表达,结果显示,HMGA1和HMGA2的mRNA和蛋白水平均显著降低。进一步在HO8910细胞中以浓度梯度转染HMGA1P6,发现HMGA1及HMGA2的表达也呈现浓度梯度变化。分析卵巢癌TCGA数无据显示HMGA1及HMGA2在卵巢癌中高表达;qPCR检测20例卵巢癌患者样本中HMGA1P6及HMGA1/2表达,热图分析发现三者具有良好的相关性。以上结果说明HMGA1P6在卵巢癌细胞中正调控HMGA1/2的表达。2、HMGA1P6通过ceRNA机制调控HMGA1/2的表达为深入探讨HMGA1P6的生物学功能,我们接下来先分析HMGA1P6在细胞内的定位,核质分离实验发现HMGA1P6在细胞核及细胞质内均有表达。