敲低或过表达NR2F1-AS1和干扰HIF-1α,探究NR2F1-AS1/NR2F1通路是否参与缺氧诱导的PC细胞恶性表型;Wes

敲低或过表达NR2F1-AS1和干扰HIF-1α,探究NR2F1-AS1/NR2F1通路是否参与缺氧诱导的PC细胞恶性表型;Western blot和免疫荧光检测NR2F1、E-cadherin、Vimentin表达变化;细胞划痕实验、Transwell实验检测PC细胞迁移侵袭能力改变。结果1、分析GEO数据库(GSE15471、GSE16515、GSE58561、GSE91035Selleckchem YH25448)表达谱结果筛选出在胰腺癌组织显著高表达的lncRNA NR2F1-AS1;TCGA数据库结果进一步显示NR2F1-AS1在胰腺癌组织中表达上调。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示NR2F1-AS1与胰腺癌患者的总生存率(p=0.029)和无病生存率(p=0.045)相关,提示高表达的NR2F1-AS1与胰腺癌患者不良预后存在显著正相关性。HCMTozasertibDB网站分析发现NR2F1-AS1在转移性胰腺癌组织中的表达明显高于原位肿瘤。与癌旁胰腺组织相比,q RT-PCR结果和组织芯片ISH结果均表明NR2F1-AS1在胰腺癌组织中表达上调。与HPDE相比,胰腺癌细胞系中NR2F1-AS1的表达明显升高。FISH和细胞核质分离实验均表明NR2F1-AS1主要定位表达于胰腺癌细胞MIA Pa Ca-2和PANC-半抑制浓度1的细胞质。2、为了探讨NR2F1-AS1对PC细胞生物学功能的影响,q RT-PCR结果显示成功构建了针对NR2F1-AS1的慢病毒表达载体。CCK-8和平板克隆实验结果表明,NR2F1-AS1敲低抑制了PC细胞增殖;Ed U增殖实验进一步验证了上述结果。细胞划痕实验和Transwell迁移实验结果提示NR2F1-AS1的敲低抑制了PC细胞的迁移率;Transwell侵袭实验表明,NR2F1-AS1敲低可明显抑制PC细胞的侵袭能力。

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