香烟燃烧提取物CSE可以导致正常肝细胞L02中PDCD4含量减少,但CSE并没有明显影响PDCD4的基因转录和翻译,提示CSE减少PDCD4蛋白水平这一作用可能是发生在翻译后的,可能是通过增加PDCD4的降解来实现的。 4.CSE可能是通过激活PI3K-Akt-p70~(S6K)通路和PKC从而磷酸化PDCD4来使其降解的,在这一过程中,MEK-ERK通路可能发挥了必要作用。
研究背景： 结肠癌是临床常见的消化道恶性肿瘤,随着我国经济水平的提高和人民群众膳食结构的变化,其发病率呈现逐年升高的趋势。传统的外科手术虽然是治疗结肠癌的最有效手段,但由于结肠癌发病的隐匿性和症状的不典型性,很多患者就诊时已达中晚期,错过了手术治疗的最佳时机。因此,化疗成为了中晚期结肠癌首选辅助治疗方案。遗憾地是化疗会产生严重的毒副反应,患者不易耐受。如何在确保治疗效果的前提下减少不良反应,是当前和今后一段时间内治疗中晚期结肠癌的研究热点。在此背景下,传统中医中药所具有的抗癌作用强、不良反应小、患者易耐受的特点逐渐受到了人们的重视。 去甲斑蝥素(Norcantharidin,

INCB018424化学结构 NCTD)是中药斑蝥的提取物。国内多家医院临床观察证实,将NCTD和常规化疗方案联合应用治疗晚期结肠癌与单独化疗相比,不但近期疗效好,不良反应轻,而且中位生存时间延长,生活质量明显提高。NCTD已经成为晚期结肠癌一线化疗的最优辅助用药。NCTD如何发挥抗癌作用,目前虽有各种解释,但尚无决定性结论。 整合素是一类细胞表面黏附因子,由α和β两种亚基通过非共价键连接而成,构成了细胞外基质与细胞内骨架蛋白之间结构与功能的桥梁。αvβ6是一种特殊的整合素亚型,在健康人上皮组织中不表达或极少量表达,但在胚胎形成、损伤修复和一系列上皮来源的恶性肿瘤中呈现高表达状态。目前,关于整合素αvβ6在恶性肿瘤发生发展过程中的生物学作用研究取得了丰硕的成果,尤其是在结肠癌研究方面更加突出。已有文献报道,整合素αvβ6可以促进结肠癌细胞增殖、侵袭,诱导其抵御凋亡,增强癌细胞成瘤能力,对结肠癌的恶性进展具有明显的调控作用。 我们前期实验证实,NCTD具有抑制结肠癌细胞表达整合素αvβ6的药理作用。本研究(第一部分)是在前期实验的基础上深入探讨NCTD抑制结肠癌细胞生长的具体机制,并为根据此药理机制开发新型靶向药物提供理论依据。

Tubacin化学结构 一直以来,关于肿瘤的起源问题,医学界始终存在两种理论：随机理论认为所有肿瘤细胞的形状、大小及体积都是相同的,任何一个瘤细胞都可分化形成新的肿瘤,但其发生过程是一些低概率的随机事件。等级理论则认为,在所有肿瘤细胞中只有极其少量的细胞可以分裂形成新的肿瘤。这些少量的具有可分裂增殖能力的细胞被称为肿瘤干细胞。它具有自我更新和分化能力,是肿瘤不断生长、侵袭迁移的根源。目前肿瘤干细胞理论得到了越来越多的实验结果支持。结肠癌干细胞是消化系统恶性肿瘤中第一个被发现的肿瘤干细胞。 按照肿瘤干细胞理论,肿瘤组织中干细胞的持续存在与肿瘤的恶性程度及预后密切相关；肿瘤干细胞大多处于G0／G1静止期,对化疗药物的耐受性远强于快速增殖期的其它肿瘤细胞；肿瘤干细胞所特有的成瘤能力是恶性肿瘤复发转移的重要因素。结合我们前期在组织学、细胞学、动物实验中的研究发现,表达整合素αvβ6的结肠癌细胞表现出的抵御凋亡、增殖侵袭和成瘤能力与肿瘤干细胞的强耐药性、无限增殖、高致瘤性等特性相一致。本研究(第二部分)初步探讨整合素αvβ6在结肠癌干细胞上的表达情况,明确其作为结肠癌干细胞新型表面标记的可能性,为分选、鉴定并深入研究该类细胞的特性奠定坚实的基础。 第一部分去甲斑蝥素通过αvβ6-ERK信号通路诱导HT-29结肠癌细胞凋亡的实验研究 目的 研究去甲斑蝥素(Norcantharidin, NCTD)诱导结肠癌细胞凋亡的药理学机制。 方法 利用MTT法检测NCTD对结肠癌HT-29细胞生长的抑制效应；明胶酶谱分析NCTD对结肠癌HT-29细胞分泌基质金属蛋白酶(MMPs)量的影响；Biotrak MMPs活性检测NCTD处理后结肠癌细胞分泌的MMPs活性变化；Hoechst 33258荧光染色检测NCTD处理后结肠癌细胞凋亡程度；流式细胞检测NCTD对结肠癌细胞表面多种整合素表达情况的影响；MTT检测多种功能性阻抗对NCTD处理后HT-29细胞生长的影响；Western

blotting分析NCTD对HT-29细胞内各种丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)表达量及磷酸化程度的影响；MTT检测多种MAPK抑制剂对NCTD处理后HT-29细胞生长的影响；免疫共沉淀实验检测NCTD对αvβ6-ERK直接连接的影响。结果 compound screening assay NCTD能明显抑制人结肠癌HT-29细胞生长,且这种抑制效应与药物浓度和作用时间正相关；NCTD能够抑制HT-29细胞MMP-9分泌及活性,但对MMP-3无明显抑制效应；NCTD能够诱导HT-29细胞凋亡,60μmol/L NCTD处理12小时,细胞凋亡率即达35.6%；流式细胞分析表明NCTD能抑制结肠癌细胞表面整合素αvβ6的表达,但对αvβ3、αvβ5的表达无明显影响,进一步Western blotting分析显示,仅有p6亚基蛋白含量明显降低,αv、β3、β5亚基蛋白含量未见明显变化；MTT实验证实αvβ6功能性阻抗10D5能够增强NCTD抑制结肠癌HT-29细胞生长的效应,整合素αvβ3、αvβ5的单克隆抗体LM609和F1P6无明显抑制细胞生长的能力；Western blotting分析证实,HT-29细胞经NCTD处理后仅有磷酸化-ERK含量随NCTD浓度增加或作用时间延长而逐渐降低,细胞内ERK、JNK、p-JNK(磷酸化.