MTT法筛选氯化锂(LiCl)的有效干预浓度显示：2000mM、200mM LiCl能抑制SW480细胞增殖（P＜0.05）；而2mM LiCl在48h能促进该细胞增殖（P＜0.05），其他时间段未对细胞产生明显的生物学效果（P＞0.05）；而20mM氯化锂在三个时间段均未见明显的细胞增殖促进或者抑制效果（P＞0.05）。故选取20mMLiCl作为本实验有效干预浓度。
2. MTT法测定各实验组细胞的增殖抑制率显示：B、C组SW480细胞增殖抑制率上升（较A组P＜0.05），且两组间有差异性，48h抑制率最大（P＜0.05）；E、F组分别较B、C组细胞增殖抑制率下降（P＜0.05），但是两组间未见差异性（P＞0.05）。 AG14699 3.FCM结果显示：B、C组SW480细胞凋亡率上升，且组间有差异性，而且G0/G1期细胞增多（较A组P＜0.05）；E、F组分别较B、C组细胞凋亡率下降（P＜0.05），G0/G1期细胞数未见明显差异性（P＞0.05）。 4.1Western blot结果显示：B、C组非磷酸化β-Catenin蛋白表达明显下调（较A组P＜0.05），组间亦有差异性（P＜0.05）；E、F组非磷酸化β-Catenin蛋白表达明显上调（分别与B、C组比较P＜0.01），但组间无显著差异性（P＞0.05）；D组非磷酸化β-Catenin蛋白表达上调（较A组P＜0.05）。 4.2Western blot结果显示：B、C组非磷酸化GSK-3β、p-GSK-3β(Tyr216)蛋白表达明显上调（较A组P＜0.01），组间亦有差异（P＜0.05）；E、F组非磷酸化GSK-3β、p-GSK-3β(Tyr216)蛋白表达下调（分别与B、C组比较P＜0.05），但组间比较无显著性差异（P＞0.05）；D组非磷酸化GSK-3β、p-GSK-3β(Tyr216)蛋白表达下调（较A组P＜0.05）。 4.3Western blot结果显示：B、C组p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达有明显下调作用（较A组P＜0.05），组间亦有差异性（P＜0.05）；E、F组p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达上调（分别与B、C组比较P＜0.05），但组间无显著性差异（P＞0.05）；D组p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达上调（较A组P＜0.05）。 结论： 1.奥曲肽能体外抑制结肠癌SW480细胞增殖和诱导其凋亡，并使其细胞周期受阻于G0/G1期；抑制GSK-3β活性可以减弱奥曲肽的抗癌效果。 2.奥曲肽对Wnt/β-Catenin信号通路的抑制作用，是通过激活GSK-3β的活性阻止信号传递实现的。
研究背景 心肌缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion JQ1 injury，I/RI）是急性心肌梗死药物溶栓和介入治疗时常常伴随的重要病理生理过程，损伤会部分抵消由血管再通带来的临床受益，并且可能导致患者病情恶化，甚至死亡。目前临床对IR/I尚缺乏有效的防治手段。I/RI的机制复杂，近期研究发现微血管水平的病理变化是其重要的病理特征之一。Scarabelli的报道也证实心肌微血管内皮细胞（cardiac
microvascular endothelial cells，CMECs）在I/RI中具有关键作用，不仅因为CMECs凋亡的发生早于心肌细胞，而且很可能是促发心肌细胞损伤的始动环节[1]。研究表明，胰岛素可通过激活“PI3K/Akt/eNOS/NO细胞生存信号机制”抑制缺血再灌注损伤诱导的心肌细胞和血管内皮细胞凋亡，从而发挥心脏保护作用[2,3]。然而胰岛素是否能够抑制CMECs凋亡，对抗IR/I，尚未有报道。 生存素(survivin，SVV)是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein，IAP)家族中最小的成员，原来对于SVV的研究多集中在肿瘤的发生及治疗方面，随着研究深入，学者逐渐揭示SVV在心血管系统也具有重要作用，包括血管损伤的修复，平滑肌细胞增殖的调控，移植静脉的重构及血管发生等。我们前期的研究证实，胰岛素可通过上调心肌细胞SVV的表达，抑制缺血再灌注损伤诱导的心肌细胞的凋亡[4]。然而生存素是否在胰岛素对CMECs的保护作用中也发挥作用，及其机制尚不明确。 本实验旨在探讨胰岛素是否对缺血再灌注损伤过程中的心肌微血管内皮细胞有保护作用，并初步探讨SVV是否在胰岛素保护CMECs中发挥作用。 研究目的 1观察胰岛素对大鼠心肌缺血再灌注损伤过程中的心肌微血管内皮细胞的功能和凋亡情况的影响。
TSA HADC 花费 2探讨胰岛素保护CMECs是否与上调SVV有关。 实验方法 分离培养大鼠CMECs，建立模拟缺血再灌注（simulated ischemiareperfusion，SI/R）模型，随机分为：(1)对照组（Control）；(2)模拟缺血再灌注组（simulated ischemia reperfusion，SI/R）：更换培养液为缺血液（NaCl137，MgCl20.49，KCl3.8，CaCl2·2H2O0.9，HEPES4，D-脱氧葡萄糖10，连二硫酸钠0.75，KCl12，乳酸20，mmol/L，pH6.5)，37℃缺氧孵箱内孵育2h，再更换正常细胞培养液，37℃5%CO2孵箱内孵育3h；(3)模拟缺血再灌注+胰岛素组（SI/R+Ins）：更换缺血液同上，再更换正常培养液的同时加入浓度为10-7mol/L的胰岛素。再灌注3h后采用MTT法检测细胞增殖能力，划痕实验检测细胞的迁移能力，TUNEL法检测细胞凋亡指数，western blot检测SVV蛋白表达。为进一步探讨SVV在胰岛素对CMECs保护中的作用，采用RNA干扰的方法抑制掉SVV的基因表达，通过蛋白质印迹的方法进行鉴定。CMECs随机分组：1）无转染组（Non-trasfected）；2）β-actin RNAi组；3）SVV RNAi组。各组转染48h后，分别给予Normal，SI/R和SI/R+Ins处理。用TUNEL法检测各组细胞凋亡指数。 实验结果 与对照组相比较，SI/R组和SI/R+Ins组CMECs的增殖能力明显降低（P<0.01），凋亡指数显著上升(P<0.01)，细胞迁移率上升(P<0.