3.细胞凋亡检测 分别收集对数生长期K562细胞及K562/DNR细胞,用不同浓度乌索酸作用,溶剂作为对照,培养一定时间后,分别收集1×10~6细胞,经Annexin/PI双染色,流式细胞仪检测。 4.细胞凋亡机制研究 用Western Blotting技术分析乌索酸引起K562细胞及K562/DNR细胞凋亡的可能机制。对数生长期细胞,加不同浓度乌索酸处理一并且定时间,收集细胞。提取的蛋白经12.5%SDS-PAGE电泳分离,电转移至硝酸纤维素膜上,经邻联(二)茴香胺,o-dianidine和β奈酚磷酸(β-naphthyl acid phosphate)显色后检测各种蛋白活化情况。推测出可能的凋亡机制。 结果 1.乌索酸能抑制K562细胞与K562/DNR细胞增殖。 2.乌索酸能诱导K5Protease Inhibitor Library cell assay62细胞与K562/DNR细胞凋亡,随着浓度和作用时间的增加,细胞凋亡率升高。 3.经乌索酸处理后,K562细胞与K562/DNR细胞中活化的Caspase-3,和Caspase-9较对照组明显增加。 4.无血清培养24h的K562细胞与K562/DNR细胞,经乌索酸处理后,发现细胞中AKT的磷酸化即活化受到明显抑制。 5.经乌索酸不处理后,K562细胞与K562/DNR细胞胞浆中活化的Cyt-C较对照组明显增加。 结论 乌索酸能够通过线粒体途径诱导K562细胞与耐柔红霉素的K562细胞凋亡,其机制可能与抑制Akt的磷酸化相关。
研究目的：食管鳞癌是一种常见的预后较差的胃肠道恶性肿瘤,尽管目前手术、放疗及化疗等手段不断改进,食管鳞癌患者的5年生存率仍不足30%。食管鳞癌预后主要与肿瘤侵犯的深度、转移淋巴结数目、远处转移与否等有明显相关性。